痰液中分泌型IgE

痰液中分泌型IgE的基本信息

1、定義

SIgE的產生部位與SIgA相似,也由呼吸道黏膜固有層中的漿細胞產生,分布于黏膜組織及外分泌液中,這些產生部位正是過敏原的侵入門戶和過敏反應好發部位。

2、專科分類

呼吸

3、檢查分類

痰液檢查

4、適用性別

男女均適用

5、是否空腹

空腹

痰液中分泌型IgE的正常值和臨床意義

1、正常值

0.1-9mg/L。

2、臨床意義

IgE是單體,8S,19×104 ku,其重鏈較γ鏈長。多一個功能區(CH4),借此可與細胞(如肥大細胞、嗜堿性粒細胞)結合,在一定條件下觸發細胞內生物活性物質釋放,故稱IgE是引起Ⅰ型變態反應的主要抗體。支氣管哮喘及過敏性肺炎患者,其痰中SIgE含量可增高。

痰液中分泌型IgE的檢查過程及注意事項

1、檢查過程

試劑準備:按試劑盒說明書要求,稀釋或配制試驗中需要的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮和高質量的。自配的緩沖液應該用pH計測量。從冰箱取出的試驗用試劑溫度應達到室溫后使用。在用HRP作為標記物的試驗中,不可用被金屬污染的容器。

加樣:按要求準備包被好的ELISA板。血清(劃體液)標本應該是新鮮采集的或在冰箱中妥善保存的,高度溶血或混濁的標本不宜使用。含疊氮鈉作為防腐劑的標本不可用于HRP標記的一步法ELISA。加樣時應將標本加在孔底,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可出現氣泡。定量測定中加樣量的準確度應達到定量要求。在定性測定中有時不強調加樣量的準確性,例如規定為加樣一滴。此時應該使用相同口徑的滴管,并保持正確的加樣姿勢,使每滴液體的體積基本相同。加酶結合物和加底物的操作和要求與加標本相同。

保溫:在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本后和加結合物后。此時反應的溫度和時間應按規定力求準確。保溫容器最好是水浴,ELISA板底應貼著水中,使溫度迅速平衡。各ELISA板不應疊在一起。為避免蒸發,板上應加蓋。也可將板平放在底部墊有濕紗布的濕盒中。濕盒應該預溫至規定的溫度,如用保溫箱保溫,空濕盒的預溫更為重要。

洗滌:洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,但卻決定關著成敗的關鍵。洗滌的目的是洗去反應液中投有與固相抗原或抗體結合的物質以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附作用是普遍性的,因此在ELISA測定的反應過程中應盡量避免非特異性吸附,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。在洗滌液中加入吐溫一類物質可提高洗滌的效果。洗滌如不徹底,特別在最后一次,如有酶結合物的非特異性吸附,將使空白值升高。另外,在間接法中如標本內的非特異性IgG吸附在固相上而未被洗凈,也將與酶標抗體作用而產生干擾。

ELISA板的洗滌一般采用以下方法;吸干反應液;將洗滌液注滿板孔;放置2min,略作搖動;吸干或傾去孔內液后在吸水紙上拍干。洗滌的次數一般為3～4次,有時甚至需洗5～6次。也可使用板式ELISA自動洗滌儀,但應該先檢查儀器的實際使用效果。洗滌儀的每枝吸液管必須同樣貼近相應孔的底部。以保證各孔的洗滌效果相同。

顯色和比色:在定量測定中加入底物后反應的溫度和時間仍應按規定力求準確。但在定性測定中反應一般可在室溫中進行。如底物為OPD,應避光放置。反應時間也不需嚴格控制,有時可根據陽性對照和陰性對照的呈色情況而及時加終止液。為確保各孔的反應時間相同,加終止液的程序和速度應與加底物液時一致。

2、注意事項

ELISA中的主要試劑成份如抗原、抗體、酶結合物、底物等,如制備不當或保存不妥,均易變質失活。ELISA的步驟多,操作如不合規范,難于得到準確的結果。因此為保證檢測的有效性,每次試驗必須進行質量控制。優良的試劑盒中提供的陽性對照和陰性對照一般可作為試驗的質控品,按其說明操作,從所得的吸光度值可以判斷試驗的有效性。以臨床檢驗中最常用的HBsAg檢測為例,試劑盒中的陰性對照應為HBsAg陰性的人血清,陽性對照應標明HBsAg含量(例如9±2ng/ml)。每批試驗應同時作3份陰性對照和二份陽性對照。陰性對照測定所得吸光度值應小于某一數值(例如0.100),而陽性對照吸光度均值減去陰性對照吸光度均值應大于某一數值(例如0.200)。這些數值為該試劑盒在規定的測定條件下,特定的實驗值。因此如測定結果符合要求,既表明所用試劑的有效性,又表明操作的正確性,只有在這種情況下,該批試驗方為有效。有的試劑盒中所含陽性對照和陰性對照不符合作為質控品的要求,或實驗室的測定條件如比色計等,與試劑盒說明中的不同,則應根據實際情況采用合適的質控品和從實驗得出的本實驗室的質控值。商品的質控血清價格昂貴。定性測定ELISA的質控品一般可自行制備。仍以HBsAg檢測為例。陰性對照可取自用高質量試劑檢測為HBsAg陰性的獻血員。陽性對照的制備可在陰性對照血清中加入適量的HBsAg陽性血清,將此混合血清與參照標準品或定量質控品作對比測定,標定其HBsAg含量。然后進行適當的稀釋,得到所需濃度的HBsAg陽性血清,再加入適量抗菌防腐劑如慶大霉素和柳硫汞后,分裝低溫凍存。