血清蛋白电泳

血清蛋白电泳的基本信息

1、定义

血清蛋白电泳即用电泳方法测定血清中各类蛋白占总蛋白的百分比。对于肝、肾疾病和多发性骨髓瘤的诊断有意义。

血清含有各种蛋白质,其等电点均在pH7.5以下,若置于pH8以上的缓冲液电泳时均游离成负离子,再向正极移动。由于其等电点,分子量和分子形状各不相同,其电泳速度就不同。故可将血清中蛋白质区分开来。分子量小,带电荷多者,泳动速度最快。按其游动速度顺序把血清蛋白粗略分为清蛋白,α1、α2、β及γ球蛋白。正常值见表,临床上血清白蛋白减少与γ球蛋白增高为肝病患者血清蛋白电泳所共有的现象,其减少与增加的程度和肝炎的损伤的范围相并行。急性肝炎早期无变化,发病第二周后即有血清蛋白的改变,慢性肝炎较急性肝炎变化明显,肝硬化变化则更为明显。因此,血清蛋白的变化对疾病诊断和预后的评估具有重要的临床意义。

2、专科分类

消化

3、检查分类

生化检查

4、适用性别

男女均适用

5、是否空腹

空腹

血清蛋白电泳的正常值和临床意义

1、正常值

琼脂糖法: 白蛋白48%-64% 1-球蛋白2.5%-5.4% 2-球蛋白8.3%-l4% -球蛋白8.7%-l5% -球蛋白12%-l5%

醋酸纤维薄膜法: 白蛋白57%-68% 1-球蛋白0.8%-5.7% 2-球蛋白4.9%-11.2% -球蛋白7.0%-l3% -球蛋白9.8%-18.2%

2、临床意义

白蛋白减少:见于慢性肝炎、肝硬化、肝癌等。

α1球蛋白(糖蛋白)增高:见于原发性肝癌。在重型肝炎、肝硬化、肝昏迷时则减少,与白蛋白呈正相关。肝病时测定α1球蛋白对判断肝炎的严重程度和预后有参考价值。一般情况下,α1球蛋白增加示病情较轻,α1球蛋白减少则提示病情较重,在严重肝功能衰竭时,其血清含量可显着降低。

α2球蛋白:病毒性肝炎初期无明显变化,一周后逐渐增加,亚急性肝炎和急性肝坏死、失代偿期肝硬化则减少。

β球蛋白增高:见于脂肪肝、高脂血症、肾病综合征、糖尿病合并高胆固醇血症、梗阻性黄疸、恶性肿瘤。在胆汁淤积性肝病时其含量升高,与α2球蛋白升高相平行。降低于见于急、慢性肝炎,肝硬化,尤以失代偿期肝硬化和坏死肝硬化下降最为显着。

γ球蛋白增高:见于慢性肝炎、肝硬化、肝胆疾患。典型肝硬化尚可见β和γ带相融合,形成β-γ桥。肝病患者γ球蛋白的变化可反映病情的严重程度。随病情好转,其含量可逐渐降至正常,如一直在高水平持续不降,提示病情严重,预后不良,并有向慢性肝炎及肝硬化发展的趋势。此外,感染、血吸虫病、多发性骨髓瘤、结缔组织病等也可升高。降低见于丙种球蛋白缺乏症、部分化疗患者等。

另外,多发性骨髓瘤在β球蛋白区带与γ球蛋白区带之间常出现M球蛋白带;双白蛋白血症可见双条白蛋白区带。

血清蛋白电泳的检查过程及注意事项

1、检查过程

将缓冲液加入电泳槽内,调节两侧槽内的缓冲液,使其处于同一平面。

醋酸纤维素薄膜的准备:取醋酸纤维素薄膜(2cm×8cm)在毛面的一端(负极侧)1.5cm处用铅笔轻划一横线,做点样标记。编号,并标明正、负极后,将薄膜置于巴比妥-巴比妥钠缓冲液中浸泡,待充分浸透后(一般为20min)取出,夹于洁净滤纸中间吸去多余的缓冲液。

将醋酸纤维素薄膜毛面向上贴于电泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取无溶血血清3～5μl于横线处沿横线加样,样品应与薄膜的边缘保持一定的距离,以免电泳图谱中的蛋白区带变形,待血清渗入薄膜后,反转薄膜,使光面朝上,平直地贴于电泳槽支架上,用双层滤纸或四层纱布将薄膜的两端与缓冲液连通,稍待片刻。

接通电源,注意醋酸纤维素薄膜上的正、负极,切勿接错。电压90～150v,电流0.4～0.6mA/cm(不同的电泳仪所需电压,电流可能不同,应灵活掌握),夏季通电45min,冬季通电时间稍长,约为60min,电泳区带展开约25～35mm即可。

染色:通电完毕,取下薄膜直接浸于丽春红S染液或氨基黑10B染色液中,染色5～10min(以白蛋白区带染透为止),然后在漂洗液中漂去剩余染料,直至背景无色为止。

定量:

比色法:将漂洗的薄膜吸干,剪下各染色的蛋白区带入相应的试管中,在白蛋白管中加0.4mol/L氢氧化钠6ml(计算时吸光度乘以2),其余各管加3ml,振摇数次,置37℃水箱20min使其色泽浸出。氨基黑10B染色用分光光度计在620nm处读取各管吸光度,然后计算出各管的含量(同时做空白管对照)。

丽春红S染色时浸出液用0.1mol/L氢氧化钠,加入量同上法。10min后,白蛋白管内加400ml/L醋酸0.6ml(计算吸光度时乘以2),其余各管加0.3ml,以中和部分氢氧化钠,使色泽加深,必要时离心,取上清液用分光光度计在520nm处读取各管的吸光度(同时作空白对照),然后计算各自的含量。

光密度计扫描法:A.透明:吸去薄膜上的漂洗液(为防止透明液被稀释影响透明结果),将薄膜浸入透明液中2～3min,然后取出,以滚动的方式平贴于洁净无划痕的载物玻璃片上(切勿产生气泡),将此玻片竖立片刻,除去多余透明液后,置于恒温90℃至100℃的烘箱内,烘烤10～15min,取出冷却至室温,用此法透明的各蛋白区带鲜明,薄膜平整,可供直接扫描和永久保存(用氢萘或液体石蜡透明,应将漂洗过的薄膜烘干后进行透明,此法透明的薄膜不能存久,且易发生皱折)。B.扫描定量:将已透明的薄膜放入全自动光密度计或其他光密度计暗箱内,进行扫描分析。

2、注意事项

空腹12小时,抽取静脉血化验,标本一定要新鲜血液。化验前要告知医生近期所服用的药物以及近期的生理改变。

血清蛋白电泳的相关疾病和症状

1、相关疾病

抗胰蛋白酶缺乏症,单克隆丙种球蛋白病伴周围神经病,急性间质性肺炎,系统性红斑狼疮所致脊髓病,慢性淋巴细胞性甲状腺炎,黄瘤,类风湿性关节炎,肾病综合征,肝硬化,大动脉炎

2、相关症状

蜘蛛蛊,烟酸缺乏,腹胀,尿失禁,遗尿,脊柱和四肢畸形,关节疼痛,黄疸,腹部肿块,腹痛

血清蛋白电泳的不适宜人群和不良反应

1、不适宜人群

无。

2、不良反应

无。