酶免法是什么

1、酶免法是什么

1971年瑞典學者和荷蘭學者分別報道將免疫技術發展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法,即酶聯免疫吸附測定法。ELISA現在已成為目前分析化學領域中的前沿課題 ,它是一種特殊的試劑分析方法,是在免疫酶技術的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術。酶聯免疫吸附劑測定法,簡稱酶聯免疫法,或者ELISA法。它的中心就是讓抗體與酶復合物結合,然后通過顯色來檢測。

2、酶免法的基本原理

2.1、使抗原或抗體結合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。

2.2、使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測定時,把受檢標本和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開,最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。

3、酶免法的優缺點

3.1、優點:高度的靈敏度,由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫學反應的結果。如白介素5,用雙抗體夾心ELIS法的測定限低至7.8pg/ml,較應用鼠BCL1細胞的生物檢定法靈敏10000倍。較高的特異性,由于應用抗原抗體反應,故和生物檢定法相比特異性較高。易于操作,快速,不使用同位素,無輻射源,適用于批處理。試劑使用壽命長。

3.2、缺點:該法測定的是待測蛋白多肽的免疫活性而非生物活性。該法不能對蛋白多肽做出陽性鑒定,如確切的生化組成和序列。易受多方面因素的干擾:一種形式的干擾來自代謝物,如果它們在原型藥的免疫測定中具有交叉反應性,就能顯著干擾生物利用度的測定;另一種干擾來至抗體的形成,這在臨床前研究尤為突出,因為給予的人蛋白對動物明顯是外源性的。這些抗體可能是中和性或非中和性的,它們可影響蛋白多肽類藥物的清除和藥理作用,并對其定量測定產生影響。

酶聯免疫吸附法的方法類型和操作步驟

ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。該法適于測定細胞培養上清、血清、血漿及組織液中的樣本,干擾小可以測到每毫升納克水平的細胞因子(或受體)的水平。在這種測定方法中有3種必要的試劑:固相的抗原或抗體,酶標記的抗原或抗體,酶作用的底物。根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件,可設計出各種不同類型的檢測方法。

雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法,操作步驟如下:將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體:洗滌除去未結合的抗體及雜質。用脫脂奶粉或BSA進行封閉。洗滌除去多余的脫脂奶粉或BSA。加受檢標本:使之與固相抗體接觸反應一段時間,讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合,形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。加酶標抗體:使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。

酶聯免疫吸附測定法是什么

酶聯免疫吸附測定法(elisa方法)采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接,然后通過酶與底物產生顏色反應,用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。在測定方法中必要的試劑有:固相的抗原或抗體(免疫吸附劑)，酶標記的抗原或抗體(標記物)，酶作用的底物(顯色劑)。

測量時,抗原(抗體)先結合在固相載體上,但仍保留其免疫活性,然后加一種抗體(抗原)與酶結合成的偶聯物(標記物),此偶聯物仍保留其原免疫活性與酶活性,當偶聯物與固相載體上的抗原(抗體)反應結合后,再加上酶的相應底物,即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。所生成的顏色深淺與欲測的抗原(抗體)含量成正比。這種有色產物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(酶標儀)加以測定。方法簡單方便訊速,特異性比較強。