脑脊液氨基酸

脑脊液氨基酸的基本信息

1、定义

神经系统中存在有大量的游离氨基酸,这些物质除参与神经系统的一般代谢过程与维持细胞内,外水分及电解质平衡外,还做为化学传递物质参与神经兴奋及抑制调节,对神经细胞有兴奋作用的氨基酸如谷氨酸、天冬氨酸等酸性氨基酸,具有抑制作用的如γ氨基丁酸(GABA)与甘氨酸。

单向纸层析或薄层层析法均不能使几十种氨基酸完全分离,双向层析是将已经过单向层析的滤纸或薄层层析板旋转90度后,再用其他溶剂进行层析,使单向层析时未分离的氨基酸得到分离。

先利用阳离子交换树脂将血清、血浆、脑脊液和尿液中的氨基酸交换吸附,用水洗去盐份后,再用氨水将氨基酸洗脱。氨蒸发后,得到较浓和较纯的含氨基酸样品,再进行双向层析,从而进行鉴定。

含硫氨基酸层析时常得不到满意的分离,可在点样后加H2O2使它们氧化成相应的砜或磺酸,再作层析分离。

2、专科分类

神经

3、检查分类

脑脊液检查

4、适用性别

男女均适用

5、是否空腹

空腹

脑脊液氨基酸的正常值和临床意义

1、正常值

HPLC法:

天冬氨酸(AsparticAcid,Asp)1.6±1.7μmol/L

谷氨酸(GlutamicAcid,Glu)4.6±1.2μmol/L

丝氨酸(Serine,Ser)33.9±4.9μmol/L

组氨酸(Histidine,His)10.0±2.7μmol/L

甘氨酸(Glycine,Gly)8.6±2.1μmol/L

苏氨酸(Threomine,Thr)32.4±12.6μmol/L

精氨酸(Arginine,Arg)35.5±6.1μmol/L

丙氨酸(Alanine,Ala)47.2±9.1μmol/L

酪氨酸(Tyrosine,Tyr)10.7±2.0μmol/L

胱氨酸(Cystine,Cys)1.0±1.1μmol/L

蛋氨酸(Methionine,Met)0.3±0.5μmol/L

缬氨酸(Vatine,Val)18.7±4.1μmol/L

苯丙氨酸(Phenylalanine,Phe)12.0±2.3μmol/L

异亮氨酸(Isoleucine,Ile)6.5±1.7μmol/L

亮氯酸(Leucine,Leu)9.3±2.7μmol/L

赖氨酸(Lysine,Lys)22.2±4.3μmol/L

2、临床意义

正常情况下CSF中氨基酸总量约为血浆中含量的10%-30%。在各种脑膜炎、脊髓阻塞水平以下变黄时,CSF中氨基酸总量明显升高;晚期神经梅毒轻度升高;多发性硬化症、老年性精神病时降低。

CSF中的氨基酸用色谱法可分离出20余种,氨基酸其临床意义如下。细菌性脑膜炎、脑膜神经根炎、癌脑膜炎、Garin-Bujadox-Bannnarth等CSF谷氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸含量升高。

无菌性脑膜CSF中甘氨酸、亮氨酸升高。结核性脑膜炎、乙型脑炎、脊髓灰质炎CSF色氨酸升高。脑脓肿、全身性感染、精神分裂症甘氨酸、谷氨酸、缬氨酸、门冬氨酸含量升高、精神分裂症还可见丙氨酸增高。肝昏迷、脑出血、癫痫、严重嗜睡病谷氨酰胺升高,而癫痫患者CSF γ-氨基丁酸浓度降低。

许多神经系统变性病如帕金森氏病、运动神经元病、脊髓小脑变性CSF中门冬氨酸升高,谷氨酸降低。癌症、胶质细胞瘤CSF中赖氨酸、苯丙氨酸浓度增高。各种氨基酸尿症患者CSF中的氨基酸可发生相应的变化,如枫糖尿症CSF中缬氨基、亮氨酸、异亮氨酸等支链氨基酸含量常增高,精氨酸血症精氨酸含量升高,赖氨酸尿症CSF中赖氨酸增多。

脑脊液氨基酸的检查过程及注意事项

1、检查过程

脱盐:取已过滤的脑脊液10ml加入装有5ml Dowex-50×8离子交换树脂的层析柱内,用100ml蒸馏水淋洗层析柱,流出液弃去。用2mol/L氨水30ml洗脱氨基酸。洗脱液在40℃真空蒸发,残渣溶于1ml蒸馏水中。

脑脊液用1ml,先经磺基水杨酸40mg去蛋白,离心后取上清液0.5ml加入装有1ml Dowex 50×8的层析柱内,用40ml蒸馏水淋洗层析柱,流出液弃去。用2mol/L氨水15ml洗脱氨基酸。洗脱液在40℃真空蒸发,残渣溶于0.05ml蒸馏水。

点样:在薄层层析板的左下角距二边1.5cm处,点加脑脊液的脱盐浓缩液4μl;点样量以2μg氨基氮为度,且直径愈小愈好。

氧化含硫氨基酸:在点样处加0.5μl含钼酸铵的H2O2,在室温放置30min。

展层:先将薄层层析板置于盛有第一向溶剂的层析缸中,展层约60min,即溶剂上升至9.5cm处时取出,再在40℃气流中吹30min。将薄层层析板转90℃再放入盛有第二向溶剂的层析缸中展层约100min,即溶剂上升至9.5cm处时取出在40℃放过夜。

向薄层层析板喷洒茚三酮试剂,再置100℃烘箱30min,观察氨基酸的紫蓝色斑点,脯氨酸斑点为黄色。

2、注意事项

腰椎穿刺CSF后,加入2ml加入磺基水杨酸钠5mg/ml振荡沉淀蛋白,立即放入冰壶,10h内送入-20℃冰箱或尽快放入-40℃--70℃保存。不超过2个月。应避免血液污染(因红细胞内Asp含量高于血浆的200倍)。要求停止服药一周后采样。采用高效液相色谱仪及氨基酸分析仪可分离测定出20余种氨基酸。有些报道的正常含量差异甚大,可能由使用仪器,方法与对标本处理及贮存条件的不同所致,且在某些疾病的CSF中氨基酸浓度的改变还存在着矛盾,因此CSF中氨基酸的测定方法与临床意义尚需进一步研究。CSF中氨基酸含量随年龄增长而升高者有谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、苏氨酸、精氨酸、胱氨酸,但无性别间差异。