腦脊液氨基酸

腦脊液氨基酸的基本信息

1、定義

神經系統中存在有大量的游離氨基酸,這些物質除參與神經系統的一般代謝過程與維持細胞內,外水分及電解質平衡外,還做為化學傳遞物質參與神經興奮及抑制調節,對神經細胞有興奮作用的氨基酸如谷氨酸、天冬氨酸等酸性氨基酸,具有抑制作用的如γ氨基丁酸(GABA)與甘氨酸。

單向紙層析或薄層層析法均不能使幾十種氨基酸完全分離,雙向層析是將已經過單向層析的濾紙或薄層層析板旋轉90度后,再用其他溶劑進行層析,使單向層析時未分離的氨基酸得到分離。

先利用陽離子交換樹脂將血清、血漿、腦脊液和尿液中的氨基酸交換吸附,用水洗去鹽份后,再用氨水將氨基酸洗脫。氨蒸發后,得到較濃和較純的含氨基酸樣品,再進行雙向層析,從而進行鑒定。

含硫氨基酸層析時常得不到滿意的分離,可在點樣后加H2O2使它們氧化成相應的砜或磺酸,再作層析分離。

2、專科分類

神經

3、檢查分類

腦脊液檢查

4、適用性別

男女均適用

5、是否空腹

空腹

腦脊液氨基酸的正常值和臨床意義

1、正常值

HPLC法:

天冬氨酸(AsparticAcid,Asp)1.6±1.7μmol/L

谷氨酸(GlutamicAcid,Glu)4.6±1.2μmol/L

絲氨酸(Serine,Ser)33.9±4.9μmol/L

組氨酸(Histidine,His)10.0±2.7μmol/L

甘氨酸(Glycine,Gly)8.6±2.1μmol/L

蘇氨酸(Threomine,Thr)32.4±12.6μmol/L

精氨酸(Arginine,Arg)35.5±6.1μmol/L

丙氨酸(Alanine,Ala)47.2±9.1μmol/L

酪氨酸(Tyrosine,Tyr)10.7±2.0μmol/L

胱氨酸(Cystine,Cys)1.0±1.1μmol/L

蛋氨酸(Methionine,Met)0.3±0.5μmol/L

纈氨酸(Vatine,Val)18.7±4.1μmol/L

苯丙氨酸(Phenylalanine,Phe)12.0±2.3μmol/L

異亮氨酸(Isoleucine,Ile)6.5±1.7μmol/L

亮氯酸(Leucine,Leu)9.3±2.7μmol/L

賴氨酸(Lysine,Lys)22.2±4.3μmol/L

2、臨床意義

正常情況下CSF中氨基酸總量約為血漿中含量的10%-30%。在各種腦膜炎、脊髓阻塞水平以下變黃時,CSF中氨基酸總量明顯升高;晚期神經梅毒輕度升高;多發性硬化症、老年性精神病時降低。

CSF中的氨基酸用色譜法可分離出20余種,氨基酸其臨床意義如下。細菌性腦膜炎、腦膜神經根炎、癌腦膜炎、Garin-Bujadox-Bannnarth等CSF谷氨酸、甘氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸含量升高。

無菌性腦膜CSF中甘氨酸、亮氨酸升高。結核性腦膜炎、乙型腦炎、脊髓灰質炎CSF色氨酸升高。腦膿腫、全身性感染、精神分裂症甘氨酸、谷氨酸、纈氨酸、門冬氨酸含量升高、精神分裂症還可見丙氨酸增高。肝昏迷、腦出血、癲癇、嚴重嗜睡病谷氨酰胺升高,而癲癇患者CSF γ-氨基丁酸濃度降低。

許多神經系統變性病如帕金森氏病、運動神經元病、脊髓小腦變性CSF中門冬氨酸升高,谷氨酸降低。癌症、膠質細胞瘤CSF中賴氨酸、苯丙氨酸濃度增高。各種氨基酸尿症患者CSF中的氨基酸可發生相應的變化,如楓糖尿症CSF中纈氨基、亮氨酸、異亮氨酸等支鏈氨基酸含量常增高,精氨酸血症精氨酸含量升高,賴氨酸尿症CSF中賴氨酸增多。

腦脊液氨基酸的檢查過程及注意事項

1、檢查過程

脫鹽:取已過濾的腦脊液10ml加入裝有5ml Dowex-50×8離子交換樹脂的層析柱內,用100ml蒸餾水淋洗層析柱,流出液棄去。用2mol/L氨水30ml洗脫氨基酸。洗脫液在40℃真空蒸發,殘渣溶于1ml蒸餾水中。

腦脊液用1ml,先經磺基水楊酸40mg去蛋白,離心后取上清液0.5ml加入裝有1ml Dowex 50×8的層析柱內,用40ml蒸餾水淋洗層析柱,流出液棄去。用2mol/L氨水15ml洗脫氨基酸。洗脫液在40℃真空蒸發,殘渣溶于0.05ml蒸餾水。

點樣:在薄層層析板的左下角距二邊1.5cm處,點加腦脊液的脫鹽濃縮液4μl;點樣量以2μg氨基氮為度,且直徑愈小愈好。

氧化含硫氨基酸:在點樣處加0.5μl含鉬酸銨的H2O2,在室溫放置30min。

展層:先將薄層層析板置于盛有第一向溶劑的層析缸中,展層約60min,即溶劑上升至9.5cm處時取出,再在40℃氣流中吹30min。將薄層層析板轉90℃再放入盛有第二向溶劑的層析缸中展層約100min,即溶劑上升至9.5cm處時取出在40℃放過夜。

向薄層層析板噴灑茚三酮試劑,再置100℃烘箱30min,觀察氨基酸的紫藍色斑點,脯氨酸斑點為黃色。

2、注意事項

腰椎穿刺CSF后,加入2ml加入磺基水楊酸鈉5mg/ml振蕩沉淀蛋白,立即放入冰壺,10h內送入-20℃冰箱或盡快放入-40℃--70℃保存。不超過2個月。應避免血液污染(因紅細胞內Asp含量高于血漿的200倍)。要求停止服藥一周后采樣。采用高效液相色譜儀及氨基酸分析儀可分離測定出20余種氨基酸。有些報道的正常含量差異甚大,可能由使用儀器,方法與對標本處理及貯存條件的不同所致,且在某些疾病的CSF中氨基酸濃度的改變還存在著矛盾,因此CSF中氨基酸的測定方法與臨床意義尚需進一步研究。CSF中氨基酸含量隨年齡增長而升高者有谷氨酸、絲氨酸、組氨酸、蘇氨酸、精氨酸、胱氨酸,但無性別間差異。